|
جزئیات محصول:
|
| نام محصول: | کیت آنزیم PCR Real Time PCR برای ویروس آبله میمون با کنترل مثبت و منفی | حد تشخیص: | 200 کپی در میلی لیتر |
|---|---|---|---|
| ماندگاری: | 12 ماه | حمل و نقل: | تحت شرایط یخ زده |
| برجسته: | 200 کپی/میلی لیتر کیت آزمایش PCR Monkeypox,کیت تست PCR Monkeypox FAM,کیت PCR Real Time Virus Virus Monkeypox |
||
کیت آنزیم PCR Real Time PCR برای ویروس آبله میمون با کنترل مثبت و منفی
کیت Real Time PCR برای ویروس Monkeypox مبتنی بر فناوری Real-time PCR است.این کیت می تواند برای تشخیص تمام نمونه های DNA استخراج شده از نمونه های بالینی مانند سواب بینی، سواب دهان و حلق، بزاق، ادرار، بافت ضایعه، اگزودا و خون و غیره استفاده شود.
این کیت برای تشخیص کیفی اسید نوکلئیک در شرایط آزمایشگاهی ویروس آبله میمون در سرم انسانی، نمونه‌های اگزودای ضایعه و نمونه‌های سواب استفاده می‌شود.نتایج آزمایش این کیت فقط برای مرجع بالینی است و نباید به عنوان تنها استاندارد تشخیص بالینی استفاده شود.
مشخصات
| نام محصول | کیت PCR Real Time Virus Virus Monkeypox |
| کانال های تشخیص | FAM |
| مدار مجتمع | VIC |
| مقدار Ct | 35 |
| حد تشخیص | 200 کپی در میلی لیتر |
| ذخیره سازی | -20℃±5℃ |
| حمل و نقل | تحت شرایط یخ زده |
| ماندگاری | 12 ماه |
| نوع نمونه | سواب بینی، سواب اوروفارنکس، بزاق، ادرار، بافت ضایعه، اگزودا و خون و غیره. |
| بسته | 24 Tests/Kit,48 Tests/Kit,96 Tests/Kit |
| اجزاء | بافر واکنش PCR، مخلوط آنزیمی PCR، کنترل مثبت، کنترل منفی |
سیستم Real-Time PCR: Molarray MA-6000، ABI 7500، ViiATM 7، QuantStudio 5، QuantStudio 6/7 pro، QuantStudio 6/7 flex، Agilent Mx3000P/3005P، Rotor-GeneTM 6000/QTMF9 iQTM 5، Hongshi SLAN-96S/96P، AGS8830، AGS4800.
اجزاء
| مشخصات فنی | LQ-000301 24T | LQ-000302 48T | LQ-000303 96T |
| بافر واکنش PCR | لوله 336μL×1 | لوله 672μL×1 | لوله 672μL×2 |
| مخلوط آنزیمی PCR | 30μL×1 لوله | 50μL×1 لوله | 100μL×1 لوله |
| کنترل مثبت | 50μL×1 لوله | 100μL×1 لوله | 200μL×1 لوله |
| کنترل منفی | 50μL×1 لوله | 100μL×1 لوله | 200μL×1 لوله |
| دستورالعمل استفاده (عدد) | 1 | 1 | 1 |
شاخص عملکرد محصول
1. حساسیت: 200 کپی در میلی لیتر.
2. ویژگی: عدم واکنش متقابل با انتروویروس (EV)، ویروس سرخک (MV)، ویروس سرخجه (RV)، ویروس واریسلا زوستر (VZV)، ویروس دنگی (DenV)، پاروویروس انسانی B19 (HPVB19)، ویروس اپشتین بار (EBv)، ویروس هرپس انسانی 6 (HHV-6) و غیره.
3. دقت: CV ≤ 5%.
رویه ها
1. آماده سازی نمونه
استخراج DNA از نمونه های بالینی مطابق با الزامات و روش های مربوطه در کیت استخراج DNA ویروس انجام می شود.استخراج شده
DNA می تواند به طور مستقیم برای تشخیص استفاده شود.اگر نمونه بلافاصله پس از استخراج شناسایی نشد، باید آن را در دمای -70 درجه سانتیگراد برای آماده به کار نگهداری کرد و از تکرار سیکل های انجماد و ذوب جلوگیری کرد.
2. آماده سازی سیستم واکنش
(1) آماده سازی سیستم: معرف را از کیت خارج کرده و اجازه دهید تا کاملاً در دمای اتاق ذوب شود.مخلوط را برعکس کنید و بلافاصله سانتریفیوژ کنید.واکنش های تست N (N = تعداد نمونه های مورد آزمایش + کنترل مثبت + کنترل منفی + 1) به ترتیب برای سیستم های واکنش به شرح زیر تهیه می شود.
| اجزاء | حجم برای 1 سیستم واکنش | حجم برای سیستم واکنش N |
| بافر واکنش PCR | 14 میکرولیتر | 14μLx N |
| مخلوط آنزیم PCR | 1 میکرولیتر | 1μLx N |
| حجم کل | 15 میکرولیتر | 15μLx N |
(2) توزیع سیستم واکنش: بافر واکنش فوق را به خوبی مخلوط کنید، سانتریفیوژ کنید و 15 میکرولیتر از مقدار کمی را در لوله های PCR مناسب برای دستگاه PCR فلورسنت توزیع کنید.(لوله های PCR را با سرعت 6000 دور در دقیقه به مدت 30 ثانیه سانتریفیوژ کرده و به منطقه درمان نمونه منتقل کنید.)
3. بارگیری نمونه (منطقه درمان نمونه)
10μL نمونه اسید نوکلئیک، کنترل منفی و کنترل مثبت را به ترتیب به لوله های PCR فوق اضافه کنید.لوله ها را محکم ببندید و با سرعت 6000 دور در دقیقه به مدت 10 ثانیه سانتریفیوژ کنید و سپس به منطقه تقویت PCR منتقل کنید.
* احتیاط: افزودن نمونه ها به ترتیب زیر است
توصیه می شود: کنترل منفی-> نمونه اسید نوکلئیک -> کنترل مثبت.
4. تقویت PCR (منطقه تقویت PCR)
4.1 لوله های PCR درپوش دار را برای تقویت در دستگاه PCR بلادرنگ قرار دهید.
4.2 تنظیم شرایط سیکل PCR فلورسانس
| برنامه | درجه حرارت | مدت زمان واکنش | تعداد چرخه ها |
1 | 50 درجه سانتی گراد | 2 دقیقه | 1 |
| 2 | 95 درجه سانتی گراد | 2 ثانیه | 1 |
| 3 | 95 درجه سانتی گراد | 1s | 41 |
| 60 درجه سانتی گراد | 13/20/35 |
جمع آوری سیگنال های فلورسنت در مرحله 3:60 ℃.35 ثانیه برای ABI 7500، 20 ثانیه برای SLAN-96S/96P، در حالی که 13 ثانیه برای سایر سیستم‌های Real-Time PCR.حجم کل: 25 میکرولیتر
4.3 دفع پس از شناسایی
لوله های PCR را پس از واکنش در یک کیسه دربسته دور ریخته و لوله های استفاده شده را به عنوان زباله های پزشکی تلقی کنید.
5. تنظیمات برای تجزیه و تحلیل نتایج
خط پایه را در ناحیه ای قبل از تقویت نمایی تنظیم کنید که در آن سیگنال های فلورسنت همه نمونه ها نسبتاً پایدار هستند (هیچ نوسان قابل توجهی در همه نمونه ها وجود ندارد).نقطه شروع (شماره چرخه) را دور از نوسانات سیگنال در شروع قرار دهید
مرحله جمع آوری فلورسانس؛نقطه پایان (شماره چرخه) را 1 تا 3 سیکل قبل از Ct اولین نمونه قرار دهید تا وارد تقویت نمایی شود.4 تا 15 سیکل توصیه می شود.
آستانه را درست بالای بالاترین نقطه منحنی تقویت کنترل منفی (منحنی نویز نامنظم) قرار دهید.
6. معیارهای کنترل کیفیت
قبل از ارزیابی نتایج نمونه، کنترل مثبت و کنترل منفی باید با استفاده از جدول تفسیر زیر تفسیر شوند، و منحنی کنترل مثبت و کنترل منفی باید به درستی انجام شود، در غیر این صورت نتیجه نمونه نامعتبر است.
| کانال ها/ کنترل ها | مقدار آستانه چرخه (Ct). | |
| FAM | VIC | |
| کنترل مثبت | Ct > 40 یا UNDET | Ct > 40 یا UNDET |
| کنترل منفی | Ct ≤ 35 | Ct ≤ 35 |
7. تفسیر نتایج آزمون
کانال های FAM برای ویروس Monkeypox، نتیجه تشخیص باید به صورت زیر تفسیر شود.
الف) مثبت: Ct ≤ 38 و منحنی تقویت S شکل است.
ب) مشکوک: 38 < Ct ≤ 40 و منحنی تقویت S شکل است، آزمایش دوم مورد نیاز است.اگر Ct ≤ 40 و منحنی تقویت S شکل برای آزمایش دوم باشد، مثبت در نظر بگیرید.اگر Ct > 40 یا Ct تهی و Ct ≤ 35 در کانال VIC برای آزمایش دوم باشد، منفی در نظر گرفته می شود.
ج) منفی: Ct > 40 یا Ct تهی و Ct ≤ 35 در کانال VIC.
د) تست مجدد: Ct > 40 یا تهی Ct و Ct > 35 در کانال VIC.
تماس با شخص: Ld
تلفن: +8613480985156
